原理：細(xì)胞是構(gòu)成生命的基本單位，在自然界中存在有單細(xì)胞生物與多細(xì)胞生物。細(xì)菌、真菌等單細(xì)胞生物，單一細(xì)胞即能執(zhí)行生命程序；高等動植物則是由許多細(xì)胞所組成的生命體，藉由分化作用使每個細(xì)胞執(zhí)行不同的功能，共同完成生命程序。但不論何種生物的細(xì)胞內(nèi)都有許多不同分子，在維持細(xì)胞生命時負(fù)責(zé)調(diào)控其生理與生化的功能。所以，如果想要在細(xì)胞分子生物的相關(guān)領(lǐng)域進(jìn)行研究，細(xì)胞的培養(yǎng)是一門基本的技術(shù)。以人工配制的基礎(chǔ)培養(yǎng)液，加上動物血清與必需生長激素，可讓細(xì)胞在離開生物體后，還可用人工方式培養(yǎng)，讓細(xì)胞得以存活并生長、增殖。

 

儀器用具：過濾瓶、血清瓶、抽氣馬達(dá)、過濾頭(濾膜孔徑0.22 ?m)、濾膜(孔徑0.45 ?m)、二氧化碳水套式培養(yǎng)箱、倒立式顯微鏡、無菌操作臺、恒溫水浴槽、酸堿度計、10公分細(xì)胞培養(yǎng)皿、無菌定量吸管。

 

藥品試劑：小鼠胚胎細(xì)胞株NIH/3T3、細(xì)胞培養(yǎng)基粉末DMEM (high glucose)、碳酸氫鈉、濃鹽酸水溶液 (6 N HCl)、100X抗生素PS混合液、小牛血清 (bovine calf serum, CS)、胰蛋白酶-EDTA (Trypsin-EDTA) 溶液、10X Phospate Buffer Saline (80 g NaCl, 2 g KCl, 14.4 g Na2HPO4, 2.4 g KH2PO4 加蒸餾水至1公升)。

 

步驟：

1.       熱去活化(heat inactivation)小牛血清：

(1)      將小牛血清自-80℃或-20℃冷凍柜移至4℃冷藏柜解凍

(2)      置于56℃的恒溫水浴槽30分鐘 (期間不時搖晃)。

(3)      以無菌管分裝，并貯存于-20℃下備用，或直接加入非完全細(xì)胞培養(yǎng)液中以配制完全培養(yǎng)液。

2.       配制細(xì)胞培養(yǎng)液

(1)      DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium)：將足以配制1公升培養(yǎng)液的培養(yǎng)基粉末與1.5 g的碳酸氫鈉先溶于950 ml的二次水，再以6 N HCl調(diào)整pH至7.0–7.2之間；加二次水至總體積為1公升后，先以0.45 ?m濾膜粗濾，再移至無菌操作臺內(nèi)，以0.22 ?m過濾頭過濾，置于4℃?zhèn)溆谩?/div>

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