I關(guān)鍵材料及方法(Subject and Methods）

本實(shí)驗(yàn)之玻璃纖維使用直接融熔法，不需要先制成玻璃球，直接把各種原料

按組成比例同時(shí)投入窯中熔融，熔態(tài)玻璃經(jīng)澄清后通過窯中的數(shù)十塊白金拉絲板的小孔流出而獲得玻璃絲。

 

 ※細(xì)胞培養(yǎng) 

 

一.基材前處理 在培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞之前，基材必須先經(jīng)過一些前處理步驟：

（1）將基材以UV燈照射約一天。 

（2）將滅菌好的基材置入24孔洞培養(yǎng)盤中。 

（3）加入70%酒精浸泡約一天，并同時(shí)用UV燈照射，以達(dá)到滅菌的效果。再用 PBS緩沖溶液沖洗浸泡，將酒精完全除去。

 

 二.初代培養(yǎng)步驟 主要在于取得小腦顆粒狀細(xì)胞（cerebellum granule cells），并培養(yǎng)在不同表面型態(tài)的膜材上。 

小腦顆粒狀細(xì)胞是來自小腦皮質(zhì)，整個(gè)過程如下: 

（1）取得小腦皮質(zhì) 先將手術(shù)器械以高壓蒸汽（autoclave）滅菌，將出生第七天大的Wistar rat，

用以過量的麻醉劑麻醉使致死（0.1ml），再以酒精擦拭老鼠體表，以避免 污染。 要取腦部時(shí)，將頭和軀干分離，

左手以鑷子固定約在嘴的部位，剪開頭皮及 頭殼，再用小鑷將頭殼打開，此時(shí)看見完整腦部，將大腦、喬腦、延腦、

小腦等 分離，并用鑷子取出小腦，將腦部置于Kreb's soln.中，再將小腦髓質(zhì)與皮質(zhì) 分離，仔細(xì)清除掉皮質(zhì)外的腦膜及微血管。 

 

（2）純化細(xì)胞 將小腦皮質(zhì)置于裝有Kreb's soln.的燒杯中，以彎頭小剪將皮質(zhì)組織剪 碎至約1mm 3 的大小，

吸取小腦皮層碎塊，置于50 ml的離心管中，加入10ml的 Kreb's soln.及1 ml的胰蛋白酶溶液（3.5％），

置于37 0 C水浴30分鐘以解碎 組織。 再加入胰蛋白酶抑制劑溶液（3.5％）1ml以及DNAse soln. 0.1ml和10ml 

的Kreb's soln.，放入37 0 C的水浴30分鐘以抑制胰蛋白對細(xì)胞的傷害。 將 離心管取出后離心，350g、5分鐘，以移除上層液體。 

加約10 ml的Kreb's soln.， 然后利用玻璃滴管將細(xì)胞用力沖散，再以350g離心5分鐘，移除上層液體，

加 入BME medium 10ml，均勻混合后，作細(xì)胞計(jì)數(shù)。 

 

（3）接種細(xì)胞 將細(xì)胞稀釋至的濃度后，接種于已裝在有待測基材的24孔洞培養(yǎng)盤上，使 細(xì)胞的密度后達(dá)到5×10 5 cells/cm 2 ，

每個(gè)材料以六重復(fù)的方式來作測試，在1824小時(shí)后換含有Ara C的BME medium，以 ??抑制會分生的神經(jīng)膠原細(xì)胞生長所 造成的干擾

 

※ MTT評估神經(jīng)細(xì)胞之活性 MTT test是利用活細(xì)胞中的粒線體可以將黃色的MTT代謝為藍(lán)色的 formazan晶體，可以用來測量細(xì)胞的貼附及生長情形，其步驟如下： 1.將培養(yǎng)盤中的medium抽出并以PBS溶液沖洗兩次，將0.1g的MTT粉末溶 于50ml的PBS溶液中，過濾滅菌，然后在每一個(gè)well中加入0.1ml的MTT 溶液，置于incubator中作用3小時(shí)，整個(gè)過程需避光。 2.在每個(gè)well中加入0.2ml DMSO溶液，在搖蕩器(shaker)上搖15分鐘，使其 均勻。 將細(xì)胞內(nèi)的MTT產(chǎn)物formazan溶出。 3.取0.1ml溶液置于96well的培養(yǎng)盤中，以ELISA Reader讀取波長570 nm的 吸光值。