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培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞離心機(jī)

概覽

Calbiochem的單株和多株抗體可以在經(jīng)過(guò)固定的培養(yǎng)細(xì)胞中用來(lái)進(jìn)行抗原的定位。備注: 細(xì)胞離心機(jī)Cytospins®可以采用福馬林固定(formalin-fixed)和石臘包埋(paraffin-embedded)兩種型式, 然后在使用上述的石臘切片進(jìn)行預(yù)處理和染色。

必要的溶液和試劑:

細(xì)胞: 位于蓋玻片上

PBS (磷酸鹽生理食鹽水緩衝液): 將8 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na2HPO4和0.24 g KH2PO4溶于800 mL蒸餾水中。使用HCl將pH值調(diào)整為7.4。加入蒸餾水使溶液成為1公升。

希望使用的固定劑如下: 1%福馬林、100%甲醇或100%丙酮。

步驟: 載玻片制備

將培養(yǎng)細(xì)胞置于殺菌蓋玻片或載玻片(例如chamber slide), 并于37°C條件下隔夜生長(zhǎng)。

使用PBS稍微潤(rùn)洗。

如下列可能步驟進(jìn)行固定(只需要使用其中之一):

在PBS中 (需保持濕潤(rùn))使用1 %福馬林固定10分鐘。

在-10°C條件下使用甲醇固定5分鐘然后風(fēng)亁。

使用冷的丙酮固定5分鐘然后風(fēng)亁。

免疫過(guò)氧化酶染色法

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