孵育液中底物濃度理論上會(huì)抑制酶活性嗎?
孵育液一般均需新鮮配制、立即使用,否則會(huì)產(chǎn)生底物的非酶性分解而形成人工產(chǎn)物。孵育液中底物濃度理論上太高會(huì)抑制酶活性,但實(shí)踐中一般底物濃度是稍過(guò)量的。孵育液中捕捉劑濃度一般也比較高,但太高也會(huì)抑制酶活性。 另外,配制孵育液時(shí),一些陰陽(yáng)離子也是很重要的,它們參與酶促反應(yīng),并與形成的終反應(yīng)產(chǎn)物有聯(lián)系。因此,孵育液中必須有合適的離子種類和濃度參與反應(yīng)。孵育液要避免嚴(yán)重的高滲和低滲。配制孵育液時(shí)各物質(zhì)要充分溶解。 否則,各種成分的濃度會(huì)發(fā)生改變。溶解各種成分的順序,一般按照己定的順序進(jìn)行。孵育反應(yīng)適合于在振蕩式恒溫水浴箱中進(jìn)行,孵育過(guò)程中不斷振蕩,使組織切片反應(yīng)均勻完全,孵育液也易滲入組織內(nèi)部中。沒(méi)有振蕩式恒溫水浴箱時(shí),在恒溫水浴箱中人工振蕩孵育液。
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