兔大腦皮質(zhì)單個(gè)神經(jīng)針對(duì)酶反應(yīng)的掃描電鏡元素分析
以兔大腦皮質(zhì)單個(gè)神經(jīng)元對(duì)/硝基苯磷酸酶一核苷酸酶為例,簡(jiǎn)略介紹一下掃描電鏡x射線微區(qū)元素分析的樣品制備和操作步驟:家兔左心室用2%多聚甲醛-0.5%戊二醛固定液灌流固定10min。 迅速取出大腦額葉皮質(zhì),用同種固定液再固定30min,蒸餾水漂洗,30%酒精分化30min.將組織塊切面均勻有序地粘在覆有一薄層明膠膜的蓋玻片上,進(jìn)行5'一核昔酸酶和反應(yīng)。酶反應(yīng)后,用Ce-Pb法和法進(jìn)行顯色。 Ce-Pb法是經(jīng)鈰法反應(yīng)后,用0.5%醋酸鉛室溫處理15min,漂洗后用2%硫化按顯色。Cc-Pb-AgS法是在Ce-Pb法基礎(chǔ)上用硝酸銀顯影液顯影10-l5min。硝酸銀顯影液配方為: ①2%明膠30m1, ②檸檬酸1. 3 g,檸檬酸鈉1. 2 g,加三蒸水5 ml。 ③對(duì)苯二酚0. 8g,加三蒸水15 ml, ④硝酸銀20mg,加三蒸水1 ml。上述四液臨用前配,并混合。
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