本文標題："腫瘤組織的DNA和蛋白質(zhì)含量的FCM測定方法"

發(fā)布者：YIYI ------ 分類: 站內(nèi)動態(tài) ------ 人瀏覽過 -----時間：2015-12-22 10:5:46

腫瘤組織的DNA和蛋白質(zhì)含量的FCM測定方法

    腫瘤細胞DNA和蛋白質(zhì)含量的測定:若樣本是腫瘤組織，
則操作方法略有不同?，F(xiàn)以軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院魏文等介紹的乳腺癌
細胞的FCM分析為例，介紹一下腫瘤組織的DNA和蛋白質(zhì)含量
的FCM測定方法。
    (1)制備細胞懸液:取乳腺癌活檢標本及乳腺切除后的癌組
織塊3 g,剪取中心部分用Hank液清洗，剪碎后加入Hank液約2
ml,攪動使組織內(nèi)細胞逸出。液體經(jīng)200目銅網(wǎng)撼去碎渣.再通過
4號針頭使細胞充分分散，顯微鏡下觀察成為單個細胞，調(diào)整細胞
濃度約為2X10'/ml。經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過撼后加入到70%冷乙醉
內(nèi)固定。置4℃冰箱內(nèi)保存數(shù)月。
    (2)染色:檢側(cè)前棄去乙醉液，PBS清洗一偏后加入RNA醉，
37°C溫育30min，放入冰浴中中止酶的作用。碘化丙咤(50ug/
ml)避光染色15min，再加入異硫氰酸熒光素(FITC) 15g/ml,染
色10min后上機測定.以正常人乳腺細胞及外周血淋巴細胞作為
DNA內(nèi)參考標準.確定DNA指數(shù)。

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