如何探討氨基酸順序測(cè)定的問(wèn)題生物顯微鏡
胰島素分子的分子幾為6000,這表示大約存50個(gè)氨基酸殘落。因而測(cè)定胰島素內(nèi)氨基酸殘革的精確順序(如果有的話)是個(gè)相當(dāng)艱巨的任務(wù)。為了了解Sanger是如何探討氨基酸順序測(cè)定的問(wèn)題,我們要記住,所有的蛋白質(zhì)和多肽在鏈的一端都有一個(gè)自由的氨基,在另一端都有一個(gè)自由的羧基。所以多肽鏈被認(rèn)為分別有一個(gè)N末端和一個(gè)C末端,并且這兩個(gè)末端氨基酸被稱為N和C末端氨基酸、Sanger的貢獻(xiàn)之一是采用一種有機(jī)溶劑,它具有專一地與自由氨基起反應(yīng)的特性。 該物質(zhì)是2,4一二硝基氟苯,或稱DNFB,肽鏈N末端氨基酸的自由氨基與DNFB反應(yīng)以致N末端氨基酸被加_L標(biāo)簽或“戴帽”。二硝基苯基和氨基酸之間所形成的鍵能抗水解作用,衍生物經(jīng)水解被分解為組成氨基酸。N端氨基酸的二硝基苯基衍生物是黃色的,所以,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)水解液進(jìn)行紙層析時(shí),在紙色譜上很容易看出來(lái),把N末端氨基酸二硝基苯基衍生物的色譜特性與已知氨基酸的相應(yīng)衍生物色譜特性加以比較,就可鑒定出N末端氨基酸,這種技術(shù)叫做末端基團(tuán)分析法。
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